Experiment: Koval. Immobilisierung von Invertase an Glas

Typ Lehrer-/ Schülerversuch SII
Kurzbeschreibung Anlagerung eines Enzyms an eine dotierte Deckgläschen-Oberfläche
Beschreibung Aus Natronlauge- und Essigsäure-Maßlösung wird gemäß Anleitung eine Acetat-Pufferlösung pH=4,6 bereitgestellt, ebenso die benötigten Reagenzlösungen. 3 Deckgläschen (DG) werden wie beschrieben vorbehandelt und auf der Oberflächen mit 1 Tropfen 3-Aminopropyl-trimethoxysilan benetzt. Das Vorhandensein der Aminogruppen auf der Glasoberfläche wird mittels TNBS-Lösung nachgewiesen, nachdem man ein DG mit kalt gesättigter Borax-Lösung behandelt hat. Die beiden anderen DG werden 15 min lang mit Glutardialdeyd-Lösung überdeckt, danach dreimal mit Pufferlösung abgespült. Der Nachweis der Aldehydgruppen wird an einem DG mittelös SCHIFFs Reagenz durchgeführt. Das verbleibende DG wird gemäß Anleitung in eine gepufferte Saccharose-Lösung und dann in Invertase-Lösung gebracht. Der Nachweis der Enzymaktivität erfolgt nach 5 min mittels 3,5-Dinitrosalicylsäure-Lösung.
Schadensrisiken durch Einatmen / Hautkontakt
Gefahrstoffe
NameSynonymeSpezifikationSignalwortPiktogrammeH- und EUH-Sätze
3-Aminopropyl-trimethoxysilan3-(Trimethoxysilyl)propylaminGefahr
H315
H318
3,5-Dinitrosalicylsäure2-Hydroxy-3,5-dinitrobenzoesäureAchtung
H302
Glutardialdehyd-Lösung1.5-Pentandial-Lösungwässrig, w=25%Gefahr
EUH071
H314
H334
H317
H302
H331
H410
di-NatriumtetraboratBoraxwasserfreiGefahr
H360FD
H319
NatronlaugeNatriumhydroxid-Lsg.Maßlösung c= 1 mol/LGefahr
H314
H290
Schwefelsäurekonz. w: >15%Gefahr
H314
H290
2,4,6-Trinitrobenzolsulfonsäure-LösungTNBS, Picrylsulfonic acid solutionwässrig, ca. 1-molarGefahr
EUH001
H302
H314
H317
andere Stoffe Saccharose, Invertase, Essigsäure c=1mol/L, SEIGNETTE-Salz, demin. Wasser
Substitutionsargument Substitution nicht erforderlich: bei richtiger Handhabung Experiment mit beherrschbaren Risiken
Sicherheitshinweise Nachweis der Aminogruppen wg. Umgang mit Borax nur für männl. Lehrkräfte!
Vorkehrungen
Kategorien Aminosäuren/ Proteine/ Enzyme, Energetik/ Katalyse/ Kinetik
Sammlungen Aulis: Handbuch der experimentellen Chemie
Quellen
AutorNameErscheinungsortISBNAusgabeSeiteandere Angaben
Glöckner et al. (Hrsg.)Handbuch der experimentellen Chemie SIIKöln 1997H. Wenck: Band 11/II Biochemie IIV 7.4.4.1
Autor Peter Slaby
bearbeitet 2015-10-11 08:26:21
erstellt 2015-10-10 20:03:27
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